苛养菌、少见菌检验心得体会讲者：陈峰
讲者：
陈峰（上海医院）
嘉宾：
卢先雷（医院）
梁立全（医院）
陈默蕊（医院）
主持：
陈杏春（广医院）
范齐文（医院）
苛养菌、少见菌检验心得体会问题总结
1、弱抗酸染液怎么配制？
简单来讲，就是将抗酸染色流程中的第二液，替换成1%硫酸（或两对半终止液），脱色时间自己比对，可能因不同的种而效果不同，我的操作是10-20秒，其余流程不变，同抗酸染色法。
2、沙黄水溶液怎么配？
我们科室是在骨髓细胞组找到了沙黄水溶液，若是你能搞到干粉，用蒸馏水按比例配制即可。
3、陈老师，诺卡有没有种出来，菌落怎么样子的？
诺卡菌（奴卡菌）因菌种不同，形态也不尽相同。有几个特征可供参考，咬琼脂、干燥、天鹅绒质感。建议看看微生物图谱。另外，需要延长培养时间，同时分区划线时多烧灼，避免正常菌丛掩盖其生长。
4、老师请问：苛养菌的药敏试验只有MIC值而没有K-B法的折点，而我们平时的操作只有K-B法，那我们的苛养菌药敏要如何开展呢？
这也是我仅用结果解释，建议经验用药的缘由之一。所谓没有金刚钻，不揽瓷器活。至于如何比较规范地做苛养菌药敏，建议你细读一下M45。
5、请问血培养布鲁菌阳性，能否推片干后滴酒精火焰固定，再行G染色？
我操作时是让它自然干燥、火焰固定后再进行的染色，所有动作尽量在生物安全柜内进行，注重自身安全防护。
6、请问血培养布鲁菌阳性，能否推片干后滴酒精火焰固定，再行G染色？
我操作时是让它自然干燥、火焰固定后再进行的染色，所有动作尽量在生物安全柜内进行，注重自身安全防护。
7、压片法对玻片有没有要求，有时候感觉压片法的背景比涂片法脏？
目前我使用新的干净的玻片，您说的背景脏现象，可能与推片的厚薄均匀程度有关。
8、每个报告都有结果解释吗？还是只有苛氧菌有报告解释？
每个都做解释是不现实的，在你想表达一些意思，诸如注意点，诸如用药建议等等情况时，说到底重要的不是有解释，而是知晓何时需要作解释。
9、请问下陈老师布氏杆菌多次染色如何注意生物安全？
这是一个现实而又尖锐的问题，可以这么讲，操作越多，风险越大。
但我是这么想的，任何医学的进步，都是建立在一定牺牲的基础上的。染色镜检、特别是柯氏染色，对于布鲁菌来讲，优点是其特异性。显微镜学特征对于该菌的早期“怀疑”、早期诊断，有着任何仪器都无法取代的作用。医院很自豪地说自己用质谱、用鉴定卡片鉴定了多少多少布鲁菌。反而是哪些有经验的老师，慧眼识菌，在很早期就看出布鲁菌的可能，避免了不必要的操作，减少了该菌引起的生物风险。那么，这些老师的经验是如何获得的呢?
10、我们经常遇到血培养瓶报阳性后，涂片染色为革兰阳性杆菌，第二天平板上为革兰阴性杆菌，有办法解决吗，老师们怎么解决处理这个问题？
这个只有多练、多总结。一般来说，不动杆菌如鲍曼，容易发生这种现象。群里有老师甚至分享了国外相关文献，证明这些情况是客观存在的。那么剩下的就是与床位医生做好沟通，互相理解罢了。
11、弱抗酸若用免疫室终止液脱色究竟要脱多久？
可能因种不同，效果不同。我一般10-20秒。
12、陈老师你好，请问你刚才说的肺炎链大概是多长时间报阳的！我们也怀疑肺炎链没有鉴定出来，是不是没有及时转种造成的？
我一共实际遇见过3例。大部分原因的确是没有及时转钟，但也不能全怪工作人员。比如晚上报阳，谁来处理？另外还发现可能是分析前的原因，病房抽完血培养，没有及时送，也有关系。
13、陈老师，少见菌的临床沟通报告是发给临床的？还是电话沟通科室存档？
目前我实际与正式报告装订在一起，以纸质版形式发给临床，同时自己留电子档。
14、少见菌的细菌都能用弱抗酸染色法染色吗？意义大吗？
任何染色仅是一种手段，而所谓有经验的老师，无非是他知道何时用哪一种手段而已。比如弱抗酸，在我革兰染色发现阳性长丝状的菌体时，就比较适用。这就是经验积累！
15、微生物标本有相关评审标准要求保存吗？
我们做“保存”这个动作，是为了提高检验质量，不是为了相关评审要求，就这么简单
16、请问CO2嗜纤维菌怎么鉴定的？
梅里埃VITEK卡片能鉴定，当然现在质谱，测序都可以。
17、弱抗酸三液中用酒精做溶剂吗？
简单来讲，弱抗酸就是将抗酸染色流程中的第二液，替换成1%硫酸（或两对半终止液），脱色时间自己比对，可能因不同的种而效果不同，我的操作是10-20秒，其余流程不变，同抗酸染色法。
18、血培养报阳后生长G+杆菌，如何报告结果？
阅片能力过关者，如实报告。李斯特菌，产气荚膜梭菌都是G＋，都有意义。
19、奴卡菌的药敏有没有比较好的方法？
也有CLSI折点，但不常见。
20、无菌体液大家都保存多长时间啊？
建议至少保留一周。CSF能保留更久，更佳。
21、弱抗酸阳性是报查到奴卡菌，还是仅报弱抗酸阳性？
弱抗酸是染色法，阳性当然报弱抗酸染色阳性。但若再结合一下长出来的菌落形态等几项特征，我觉得可以报到属水平。
22、一个简单问题，微生物生长需要一定的湿度，那培养箱里用放一盆水吗？关于烛缸，里面也需要放水吗？
我们也的确放水，不过也要注意污染。
23、苛养菌的培养，医院具备什么条件？
苛养菌、医院可能硬件不足，但也并非全无优势。一些少见医院遇上的多。医院来的往往是那些耐药菌比较多。作为同行能给的意见是，想办法把每一次少见菌苛养菌的鉴定，都搞个明白的结果，不要半途而废，并加以积累。这也是我们做测序互助平台的初衷。
24、对于布氏杆菌血培养直接涂片染色，柯氏染色和瑞氏染色确实都挺好看的，但是我总觉得这些染色是需要重新再涂片的，这样增加了再次污染的可能，在日常工作中我们选择的方法是把报阳血培养涂片革兰氏染色看不到或者不太肯定的涂片脱镜油后，重复革兰氏染色的步骤，现传上来我的一张幻灯片里的血培养涂片布氏杆菌，想请老师们分析一下这种方法有什么不妥吗？
其实布鲁菌的染色，无非也是要意识到可能是该菌，你们已经有经验了，难就难在其他同行的首次检出。
25、陈老师：以前曾偶尔遇到过血培养阳性（需氧瓶），涂片一般为革兰阴性杆菌，但血平板、巧克力平板均不生长，点种金葡也不长，用阳性血瓶抽取肉汤倒平板也不长，陈老师能否帮忙分析一下原因，怎样才能培养并鉴定出来这类细菌？
可能是肺链，也可能是培养条件问题（如弯曲菌），可能需要分子学手段的帮助。
26、痰标本奴卡菌可以象结核菌一样高压后再推片吗？
我曾在高压后做结核抗酸涂片的镜下找到过奴卡，那是染成蓝色的。不过不建议那么做，还是不高压，直接染比较好。
27、弱抗酸染色时直接用终止液呢还是与酒精配合？
我的操作只用终止液。
28、质谱可以鉴定布鲁氏菌吗？
要么买质谱生物风险菌专用菌种数据库，要么自建库（辅助鉴定），可以解决这个问题。如果感兴趣，你可以医院的老师，听听他们讲的真实故事。
29、如果报阳血瓶血涂片革兰染色未见菌，培养平板未生长，培养平板上涂的血膜染色也未见菌，是不是就可以确定是假报警？
用其他染色法筛一遍，比如我说最终答案是NTM。
30、这样的报告单也就是不是确定的报告单发给临床会不会引起纠纷？
注意用词、谨慎引证、合理解释。若我们对“纠纷”的注意力远大于“解释”的担当。那说明我们已经偏离了以“救死扶伤”的初心，发展轨道偏向医患纠纷调解办公室主任职位了，那是真正的悲哀。
31、我们碰到过脑诺卡的病人，脑脓肿引流液涂片培养都是诺卡，建议临床使用磺胺类药物，医生采纳了，但是才用了两天，病人出皮疹，关节疼痛，就只能停了。像这类用不了磺胺类药物的病人该如何建议用药呢？
可以查阅一下热病指南、MCM等国际化的参考依据。
32、少见菌的生化鉴定能用普通的肠杆菌科或葡萄球菌等生化管做吗？
如果液相培养液能提供合适、足够的生长所需必须营养物质，那我觉得可以。
33、布鲁菌为啥用革兰染不出？
没说染不出，有经验的老师能认出。但着色性可能不如其它染色法。
34、用解脲试剂做脲脢，稀释吗？用支原体试剂做快速脲酶比例是多少呀？
我觉着不用稀释，但瓶子液体太多，是否弃去一部分。这个问问有实战经验的老师。
35、卫星试验中的金葡菌有特殊要求吗，还是只要是金葡就行？
目前我的经验是，全部金葡菌都可以。当然您也可以在工作中留心有没有特例。
36、血培养出苛氧菌，阳性曲线有特点吗？
所谓苛养菌，一般生长时间不会太短，所以应该不像肠杆菌那样第1、2天报阳。比如布鲁菌，往往在第4天报阳。隐球菌可能在10多天才报阳。
37、血培养报阳，但是转种没有生长，在当前实验条件下无法获得活的细菌进一步鉴定和药敏怎么和临床沟通？
平时若苦练基本功，如镜下阅片，这时就能派上用场了，先报告染色特征，给个方向也好，如革兰阴性菌。
38、用uu试剂做快速脲酶培养多长时间？
所谓快速脲酶、短则几分钟，我觉着1小时以内吧
39、痰培养放48小时就丢了，努卡菌会不会漏检？
那是很可能漏检的，很多奴卡我们是72小时检出的。不过老师您的漏检关键还是在痰涂片这一关。
40、老师尿酶是用PCR的什么试剂代替？
胃镜室有快速脲酶试剂，亦或是解脲人型支原体液体培养小瓶子内液体。
41、诺卡菌的检出率有多少？
检出率很低。若不用心，更低。
42、可以直接用报阳的血标本做尿抗原么？
可以作为一种参考依据
43、各位老师，关于肺炎链球菌的标准菌株保存有没有什么好的方法？
请参考各类出版书籍保种方法篇章，我们这是用羊血甘油肉汤。
44、我遇到梅立埃肺炎链球菌自溶的。只送一个血培养瓶报阳，怎么转不生长。如何处理这种情况？
试试看用抗原佐证。
45、陈峰老师好，柯氏染色第一液加热后，脱色吗？
不脱色。
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