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您好，为什么我的荷瘤小鼠老是成不了瘤啊？

荷瘤小鼠成不了瘤有可能是细胞存在问题，建议排查一下支原体污染哦。

什么是支原体？

支原体又称为霉形体，是一类没有细胞壁、高度多形性、能通过滤菌器、可用人工培养基培养增殖的最小原核细胞型微生物，大小为0.1～0.3微米，具有可塑性。用普通染色法不易着色，姬姆萨染色很浅，革兰氏染色为阴性；对干扰细胞壁合成的抗生素，如青霉素等，具有天然抗性等生物学特性。这也是细胞培养过程中易于污染的一个重要因素。

支原体污染在细胞长期培养过程中经常出现且不易消除，据调查及研究显示，实验室30％、60％细胞都被支原体污染过，其中95％以上是由口腔支原体(M．orale)等5种造成。支原体污染初期，高倍镜下观察细胞无明显变化但有细小黑色颗粒；随培养时间延长，尽管培养液不浑浊，但pH值变化明显、颜色变黄，在污染后期引起细胞变形，对后续科研产生严重影响，因此在细胞培养过程中进行支原体检测与防治十分必要。

支原体污染细胞的严重性

支原体最早发现于年，之后国内外关于支原体污染细胞的报道屡见不鲜。它通常附着于细胞表面，并影响其宿主细胞的生理、遗传等多方面的正常功能，用这些污染后貌似正常的细胞做实验或生产，将会严重影响结果。

由于支原体的直径仅有0.13~0.18μm，常规显微镜下无法观察支原体的存在，细胞被支原体污染后，培养液不会变浑浊，最典型的特征是，细胞碎片增多，细胞周围出现黑色小点，严重时呈“细沙”状，细胞空泡化，出现类似细胞凋亡现象，最终细胞漂浮，完全死亡。可以通过细胞换液、传代得到暂时缓解，但最终趋向死亡。

对细胞生长繁殖和形态的影响

支原体可使培养液中支持细胞生长的营养物质含量减少，造成细胞生长缓慢甚至停止；另外还会导致细胞微管解聚，引起细胞一系列病变，表现为细胞收缩、贴壁细胞脱落、裂解等。

对细胞代谢和功能的影响

支原体污染对细胞代谢及功能的影响主要表现在以下几个方面：

（1）培养液中的精氨酸被支原体大量消耗，引起细胞蛋白质、DNA、rRNA、mRNA的合成障碍；

（2）支原体活动使培养液成分发生改变（如发酵型支原体降解糖类产生酸性物质），影响细胞代谢;

（3）支原体吸附在细胞表面，破坏细胞膜的完整性，影响细胞信号传递；

（4）支原体消耗细胞的核苷库，引起细胞染色体异常。

引起染色体异常

改变染色体组型，通常可导致细胞染色体断裂、数目减少，出现双着丝点染色体、环状染色体等。

对免疫细胞产量的影响

支原体能影响巨噬细胞的活性，抑制干扰素的合成和降低其活性，加大了继发感染其他细胞和病毒的几率，同时，通过植物血凝素干扰淋巴细胞的刺激、分化。

发现支原体污染应该怎么处理呢？

支原体感染细胞后一般难于清除，事实上，被支原体污染的细胞，即使污染被清除，细胞原有的生物学特性，如基因的表达、抗原性和代谢特点也随之发生了相应的改变，会对研究结果造成严重影响。

为了保证细胞体系免受污染的影响，关键是加强预防尽可能减少污染的发生，如：保持实验室环境的清洁和良好的操作习惯。另外，选择优质的试剂也可有效避免。

这也就是为什么瑞业要求在正式开展实验前，必须进行支原体检测。不仅可以有效避免支原体污染影响肿瘤细胞的细胞活力与成瘤性，还可以保证实验结果的有效性与准确性。

■参考文献

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[2]张向萍.细胞培养过程中发生支原体污染的影响及检测[J].才智,(24):.

[3]邢龙彬,刘长政,焦晓磊,刘彤,杜智,高英堂.细胞培养过程中支原体污染的防治与检测方法[J].世界华人消化杂志,,24(10):-.

长按