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鸡滑液支原体（Mycoplasmasynoviae，MS）是引起鸡和火鸡传染性滑膜炎（Avaininfectionsynovitis）的一种急性或慢性传染病的病原。传染性滑膜炎临床上以关节肿大、滑液囊和腱鞘发炎为特征。鸡一旦感染滑膜囊支原体，持续排毒，极难根除，给世界家禽养殖业造成巨大的经济损失。

Olson于年首次在美国发现传染性滑膜炎，随后在世界各国均有报道。近年来，鸡传染性滑膜炎的危害逐步加重，导致中国家禽养殖场数百万只鸡死亡。

宁夏地区鸡滑液囊支原体抗体阳性率为67.18%，最高达89.67%。川西地区阳性检出率为41.33%，场阳性率为73.33%。

广东、广西、江苏、浙江、福建等地10个省份不同地区养殖场均有发生，平均感染率为8.89%，平均死亡率为2.16%。

地区MS抗体群体阳性率为%，群内个体阳性率均高于80%；病原群体阳性率为%，群内个体阳性率分别为15.4%、17%和21%。

华北、华中、华南、东北、西北、华东地区11个省份的发病率为5.75%~25.77%，血清阳性率为30.23%54.67%。病原菌分离率为37.1%。

江苏部分地区鸡场鸡群血清阳性率最高达到82.4%，最低为38.9%，总体平均阳性率为57.7%。

然而，滑膜炎的分布多为区域性，很少发生大规模的暴发。

除气囊炎和滑膜炎外，由滑膜炎引起的蛋壳顶端异常(EAA)和产蛋下降综合征在世界各地都有发生，因此，人们越来越重视对滑膜炎的流行情况的了解，特别是其亚临床感染。

许多免疫抑制病原体可与鸡滑液囊支原体相互作用，导致宿主发生严重疾病。鸡滑液囊支原体亚临床感染合并与禽流感病毒(AIV)H9、传染性支气管炎病毒(IBV)、鸡新城疫病毒(NDV)或传染性法氏囊病病毒(IBDV)引起更严重的呼吸道或系统性疾病感染。

目前，河南省鸡滑膜支原体病的发病率和流行病学研究报道较少，为此，从河南省规模化鸡场采集病死鸡进行鸡滑液支原体的分离鉴定，并对某蛋鸡场发生关节肿大跛行的产蛋鸡关节中分离出的1株鸡滑液支原体进行进一步研究，旨在为河南省鸡传染性滑膜炎的流行病学调查、诊断和防治提供依据。

1材料和方法（略）

2结果与分析

2.1鸡滑液支原体的分离培养

PPLO液体培养基发黄后接种PPLO固体培养基，3~10d后，肉眼可见极为细小、光滑、致密的小菌落，半凹陷于培养基内，在低倍显微镜下观察到菌落形态为特征性的“煎蛋状”。挑取变黄的液体培养基经吉姆萨染色，油镜下观察到菌体形态为球形、椭圆形、丝状或螺旋状（图1）。

A．鸡滑液支原体菌落形态；B.鸡滑液支原体菌体形态

鸡滑液支原体菌落和菌体形态

2.2鸡滑液支原体的鉴定

从图2看出，扩增出预期bp大小相同片段。经测序与鸡滑液支原体标准株（CVCC）同源性均在99%以上，与GenBank中鸡滑液支原体的16SrRNA的同源性均在99%以上，而与其他支原体的同源性均在94%以下，证明所分离的菌株均为鸡滑液支原体。从份病料中共分离出25株鸡滑液支原体，分离率达15.7%。

1：阴性对照；2、3：鸡滑液支原体分离株；4：阳性对照（鸡滑液支原体标准株

鸡滑液支原体的PCR鉴定

图3HNMsySrRNA基因同源性分析

2.3毒力试验结果

试验组鸡12d后表现出临床症状：精神不振、产蛋异常、跛行、生长、跗关节和趾关节肿胀，共死亡2只。对照组体温、精神、饮食、产蛋等正常。试验结束后剖杀所有供试动物，采集病料，进行鸡滑液支原体分离。试验组剖检发现，鸡只消瘦，胸骨下有囊肿，肿胀关节有黏液性、纤维素性分泌物，气囊浑浊，心包渗出（图5）。对照组剖检均无明显的病理变化，均未分离到鸡滑液支原体，试验组均分离到鸡滑液支原体，PCR鉴定为鸡滑液支原体。

A.消瘦、囊肿；B.气囊浑浊、心包渗出；C.关节肿胀；D.脚垫肿胀

图5HNMsy1攻毒后鸡剖检变化

2.4免疫原性试验结果

攻毒后，对照组鸡第12d开始陆续出现精神不振、消瘦、关节肿大、产蛋异常等临床症状，全部发病，共死亡2只。剖检发现，极度消瘦，胸骨下有囊肿，肿胀关节和脚垫有黏液性、纤维素性分泌物。疫苗组的10只鸡均没有出现临床症状和病例变化(图6)。从关节分离鸡滑液支原体，对照组均能分离到鸡滑液支原体，疫苗组全部未分离出鸡滑液支原体。说明HNMsy1具有很好的保护效果，攻毒保护率为%。

A.消瘦；B.关节脚垫肿胀

HNMsy1疫苗免疫攻毒后鸡剖检变化

3结论与讨论

本研究采集河南省规模化鸡场发生关节肿胀、消瘦、产蛋下降、零星死亡的鸡的关节共份，经过培养、镜检、PCR鉴定、测序比对分离出鸡滑液支原体菌株25株，分离率15.7%。对其中1株蛋鸡关节分离株HNMsy1进行了毒力试验和免疫原性试验，毒力较强，免疫原性好。研究结果为河南省鸡滑膜炎的流行病学调查、疫苗毒株的筛选、传染性滑膜炎的诊断和防治提供依据。

鸡滑液囊支原体在不同地区均感染严重，对鸡群危害巨大，给行业带来的损失难以估算。

本研究中，河南省鸡滑液支原体的分离率达15.7%，感染率是比较高的，有很多病变典型的鸡没有分离出鸡滑液支原体，可能由于用药过度，虽然药物杀灭并清除了MS，但对机体造成了不可逆损伤，可见明显的临床症状及病理病变。另外由于鸡滑液支原体培养条件苛刻，需要特殊的生长因子，而且由于混合感染的情况非常普遍，因此其他细菌及支原体类微生物的生长会干扰和掩盖MS的生长，极易与其他致病性或致病力弱的支原体如鸡毒支原体、鸡支原体、精氨酸支原体、无胆甾原体等在形态上很难分辨，只有序列比对才能确定，所以导致极难分离，因此实际感染率可能远远高出15.7%，感染情况十分严重，对河南省的养鸡业造成的损失巨大，应当引起足够的重视。

16SrRNA是MS较为保守的基因，在所有MS分离株中同源性都在99%以上，而与其他支原体类同源性较低，因此可以作为鉴定MS及区别其他支原体的靶基因。在对HNMsy1毒株的序列进行比对时，由于GenBank中鸡滑液支原体的16SrRNA的信息较少，特别是国内毒株的信息更少，HNMsy1与英国毒株CVCC、南非毒株B-14-10、B-14-2、B-15-7-、B-15A-7-2、河南株HN01亲缘关系最近，因此需要更多毒株特别是国内毒株的生物信息以待更深入的研究MS的来源及其变异情况。

使用抗生素是治疗传染性滑膜炎的主要手段，而抗生素在肉鸡和蛋鸡的生产中有明确的限制使用，并且由于抗生素的长期滥用，使得耐药性日益严重，在临床中治疗效果非常不理想，药物残留严重。疫苗免疫是防控传染性滑膜炎最有效的措施。国外使用的主要是鸡滑液囊支原体病弱毒疫苗（MS-H株），国内还没有弱毒疫苗。目前，还没有商品化的鸡滑液囊支原体灭活疫苗，灭活疫苗和亚单位疫苗都在研究之中。

本研究选择的1株分离自发生典型滑膜炎鸡场发病鸡关节的毒株HNMsy1对鸡进行攻毒，能够复制出典型的且较为严重的滑膜炎病例，引起部分死亡，说明该毒株毒力较强。用该毒株制备的疫苗免疫鸡，攻毒后，能够提供有效保护，免疫原性较好，可以作为鸡滑膜炎疫苗的候选毒株之一，还需要进一步研究。河南省MS的分离鉴定，16SrRNA的遗传进化分析，HNMsy1分离株的生物学特性研究为河南省MS的流行病学、病原生物学、免疫学及疫苗的相关研究奠定基础。

致谢本文作者：河南省农业科学院畜牧兽医研究所

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