A.Paterna等著
范占炼翻译
摘自：JournalofDairyScienceVol.96No.11,
本研究检测了28个采自传染性无乳综合征流行区（西班牙东南部）山羊的无乳支原体菌株的几种药敏试验。每个病原菌测定了喹诺酮、大环内酯、氨基糖甙和四环素类12种抗生素的最小抑菌浓度（MIC)。MIC最低的抗生素依次是恩诺沙星、环丙沙星、泰乐菌素和强力霉素，MIC90（90%抑菌最小浓度）均低于1μg/mL。诺氟沙星（喹诺酮类）MIC变异大（0.1-12.8μg/mL），提示喹诺酮类抗生素某一种产生耐药性不会诱发恩诺沙星、环丙沙星（同一类其他抗生素）耐药性。红霉素MIC90最高不推荐使用。最后，临床症状山羊分离出来的菌株MIC50（50%抑菌最小浓度）和MIC90比亚临床症状菌株要高，临床无乳综合征抗生素广泛使用与MIC变异之间的关系需要进一步研究。
关键词：无乳支原体，抗生素，最小抑菌浓度，传染性无乳综合征
无乳支原体是无乳综合征的主要病原菌，主要在小反刍动物发病，引起乳房炎、关节炎、角膜炎、肺炎和流产，该病全世界都有分布。在奶用小反刍最特征性症状是乳腺感染、不产奶和乳腺退化。大部分泌乳群爆发感染，随后因奶损和动物损失而失去经济价值。而且在流行区，持续慢性感染，能从最近发病群或非发病群分离出病原体；如从隐性感染群耳朵或大缸奶。在山羊群无乳综合征爆发中发现丝状支原体山羊亚种一单克隆株，在无最近发病史也无病症的羊群耳组织和大缸奶中分离不同株的丝状支原体山羊亚种。近来研究中，无乳支原体在乳房炎样本和流行区无症状羊群大奶缸中分离出。而且流行区奶山羊场不同感染源存在不同的菌株。除了奶损外，无乳综合征爆发或慢性感染会因执行疾病控制管理流程造成严重的经济损失。
无乳综合征控制是综合的，主要是抗生素治疗和预防性操作流程。因支原体缺乏细胞壁，所以对β-内酰胺类抗生素不敏感。此外流行区慢性感染导致失败的抗生素治疗，会引起耐药性。已知对支原体有效的抗生素是大环内酯、氟喹诺酮、四环素和氨基糖甙类。大环内酯和喹诺酮广泛使用，然而确发现大环内酯、氟喹诺酮部分耐药和基因突变产生。在流行区已检测出的基因突变株会导致治疗无效。
考虑到感染的无乳支原体不同的临床和流行特点，本研究设计了28个分离菌株对12种抗生素的MIC测定。菌株一部分来自本实验室培养收集的，根据临床症状和采集部位进行分类。样品在改良Hayflick培养基（一种支原体专用培养基）培养，并在琼脂观察特异性支原体菌落。单一菌落二次培养并用种鉴定生化试验（四唑还原和膜点产生）和PCRpolC目标基因。为了当前用途，根据流行资料选择分离株。来自有典型症状（乳房炎、关节炎和眼结膜炎）3个山羊爆发群18株：9株来自乳房炎样品，2株来自结膜炎拭子，2株来自乳房炎的外耳道拭子，2株来自关节液，3株来自3个山羊群大缸奶。剩下来自无爆发羊群的10个样品：6个山羊群大缸奶，3个分别来自3个羊群的3只羊外耳道，1个来自1头公羊精液。外耳道和精液样品取自大缸奶阳性群。
知识点：MIC值越低代表该病原对该抗生素越敏感，杀灭效果越好
测试的抗生素中，恩诺沙星，环丙沙星，泰乐菌素和强力霉素MIC最低，1μg/mL，其中恩诺沙星又最低(MIC90=0.1μg/mL)，MIC90红霉素最高，与原先曾报道的红霉素对牛支原体和人型支原体高MIC的报道一致。在治疗无乳支原体应该考虑到因为红霉素常用于治疗乳房感染但它对无乳支原体无效。
泰乐菌素对无乳支原体药效临界浓度如下：≤1μg/mL为敏感；≤2μg/mL中等敏感；≥4μg/mL不敏感。本研究MIC4μg/mL，显示较好的敏感性，与其他大环内酯相反。
氨基糖甙类MIC90较高，链霉素最高（MICμg/mL）。腺嘧啶在大肠杆菌16SrRNA位置的存在造成了耐药性。这种突变也存在于人支原体，包括无乳支原体，与链霉素耐药性有关。喹诺酮对无乳支原体MIC最低，与曾经报道绵羊无乳支原体体外药敏试验一致。
▲Table1.奶山羊临床和亚临床无乳综合征分离的无乳支原体MIC(μg/mL)
恩诺沙星和环丙沙星也最低，都1μg/mL。Han-nan曾在年提出恩诺沙星MIC敏感值:≤0.5μg/m；≤1μg/mL为中等；≥2μg/mL为耐药性。按照该临界点，21样品对诺氟沙星有耐药性，4个样品中等敏感；然而环丙沙星无耐药性，恩诺沙星只有2个样品是中等耐药性。测试的3种喹诺酮抑制促旋酶或拓扑异构酶IV，阻碍细胞分裂。喹诺酮耐药性产生是因为DNA促旋酶亚单位gyrA和gyrB或拓扑异构酶IVparC和parE喹诺酮作用点位置发生点突变产生氨基酸替代。
临床无乳综合征羊群分离出来菌株诺氟沙星、卡那霉素、链霉素和庆大霉素MIC90和MIC50均高于亚临床症状的菌株（见表1），壮观霉素和螺旋霉素MIC50也高，这跟抗生素在这些羊群广泛使用有关，可能诱导出耐药性，应该进一步研究确认。尽管在西班牙这些抗生素大多数不允许用于治疗山羊乳腺炎或兽医用途。缺乏山羊用的具体产品下，兽医可以通过乳区灌注（红霉素）或肌肉注射使用它们。
我们发现无乳支原体对红霉素和链霉素有天生的抵抗力，所以这些抗生素不推荐用于治疗无乳支原体感染。喹诺酮类MIC最低，尽管MIC50和MIC90提示与其他支原体相比无乳支原体可能有不同耐药机制。最后临床症状群菌株MIC要高于无症状群，流行区MIC值高与抗生素广泛使用是否关联需要进一步研究。
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