细胞库是我们生物制药的源头，是重中之重，必须有一份详尽的细胞库测试规范和流程，用以证明我们所生产的生物制药产品的安全性、纯度、理化指标和有关药效的指标。

生物制药的研究者应该掌握细胞库建立方面的技术，无论是准备用于GMP生产，还是在研究阶段的主细胞库（MCB）、工作细胞库（WCB）、生产结束（EOP）细胞库、研发（R＆D）细胞库（CB）的建立都需要良好的专业知识；当然还有比较先进的设备和环境、良好的质量控制和持续监控、人员之间的密切沟通并持续进行问题排除和研究。此外，表征这些细胞系统的实验过程可能很广泛和复制，需要有针对特定细胞的一系列测试。从构建测试到身份和遗传稳定性测试，重要的是研究人员需要清楚的了解细胞库建立的检测项目，以及何时进行这些测试的最佳时间和测试如何影响整个研究项目进度和结果。

生产用MCB定义为单个细胞池的等分细胞样品，通常是在限定条件下从选定的克隆中制备单个细胞，然后分配到多个容器中，并在限定条件下进行存储。MCB通常来自研究细胞库，它是细胞系构建筛选的“终点”。从在限定的培养条件下培养MCB获得的均质细胞悬液制备WCB。

通常根据研究进程对细胞库进行分类：R＆DCB（研发），MCB，WCB和EOPCB。另一种常用名称反映了细胞库用途及是否是GMP状态：非GMP细胞库（或R＆D细胞库，GMP非生产用细胞库（例如用于生物测定的细胞库）和GMP生产用细胞库。

通常，在GMP生产中，非GMP（R＆D）细胞库是按照与GMP库相同的一般规则和条件来准备的；但是，并不需要严格遵守GMP。GMP非生产细胞库通常以非生产模式生产，这意味着可以在同一实验室中同时制造和培养多个细胞库。在这种情况下，必须使用适当的清洁和转换程序来避免细胞之间的交叉污染。GMP非生产细胞库通常在基于细胞的效能测定中用作检测和鉴定的细胞。

最近，对即用型生物测定细胞库（RTU）的需求有所增加。这种细胞库的目的是在生物测定中直接使用来自小摇瓶的细胞，从而省去了细胞扩增步骤并节省了过程时间。RTU库通常较大（-个以上的样品瓶），每个样品瓶有大量的细胞。高细胞活率（80％甚至90％）是研究者的普遍期望，因此，从小型研究细胞库扩展到规模庞大的细胞库时，存在潜在的风险问题，因此强烈建议进行更多的研究。

GMP生产用细胞库大多以正规生产模式生产建立，这意味着一次只能在一个细胞库建立中生长建立一个细胞系。GMP生产细胞库中的细胞用于制造生物药物产品，所以GMP生产细胞库的细胞的生存活率预期通常要70％。

细胞库生物安全性测试、风险评估和监管

为了确保细胞库的纯度和安全性，有必要彻底、准确的风险评估来设计和实施全面的测试检测程序。作为评估的一部分，重要的是要考虑已准备好细胞库的类型，因为进行检测的原理因所生产的细胞库的类型的不同是有所不同的。例如，用于非生产性细胞库（用于分析测定的细胞）或用于扩展以创建MCB的种子细胞的检测程序通常比为生产性细胞库实施的检测程序要简化得多。

对所有细胞库的检测应包括支原体和无菌检测，还应该在将细胞带入清洁设施或车间之前就进行这些检测以免污染洁净区。无菌测试可确保细胞不含细菌、真菌和霉菌，这些细菌、真菌和霉菌可通过受污染的细胞，使用受污染的动物或植物来源的原材料、操作人员或将污染引入洁净区的设施。按照药典方法进行无菌测试，重要的是，在无菌测试之前要进行抑菌和真菌测试，以评估样品培养基质是否对检测有抑制作用。

同样，支原体是一种常见的细胞培养污染物，通常来自细胞本身，添加剂或实验室人员。支原体污染不仅会导致细胞代谢变化，最终影响产品的产量和质量，而且还与许多人类疾病有关。因此，重要的是要确保细胞对支原体测试呈阴性。按照药典方法进行标准支原体测试，理想情况下应该在常规测试之前进行支原体测试，以评估样品基质的抑制作用。鉴于支原体测试需要四周才能完成，因此已经开发出了快速的方法，这些方法显示出可比的敏感性，只需几天即可完成。所以，对于非生产种子细胞，支原体和无菌性通常是唯一执行的生物安全性测试。对于打算用于分析测试的非生产型细胞，附加的表征测试应着眼于特定细胞在其预期的生物测定中的性能测试。

法规对生产细胞库测试的期望比非生产细胞库需要更高的表征水平。MCB是整个生产过程的原材料。监管部门的要求是，对于已经检测过的微生物以及包括外源性因子在内的病毒性因子，它们均具有充分的特征。除非对细胞库进行了更改，否则此测试仅执行一次，在这种情况下，应对新的细胞库进行重复测试。由于WCB仅是MCB之外的一小部分，因此减少测试是可以接受的。这种简化的测试通常包括无菌，支原体和最少的病毒测试。体外极限细胞寿命（CAL）或EOP库被认为是扩增存在的任何污染物的最坏情况。这些细胞库还需要进行一次完整的特性测试。请参阅下表I，以了解每种细胞库的监管测试摘要。

表一：每种细胞库测试预期时间

MCB：主细胞库，EOP：生产结束细胞库，WCB：工作细胞库。

像已经讨论过的微生物制剂一样，病毒制剂可以通过原材料（例如细胞或原料）以及从操作员或受污染的设施中引入。牛血清和胰蛋白酶等原材料仍然是该行业中病毒污染物的常见来源。在设计病毒测试计划时，了解细胞库的整个研究并进行全面的风险评估至关重要。细胞系是否已暴露于血清或胰蛋白酶？如果是这样，是否受到了辐射？尽管可能不再在生产过程中使用基于动物的原材料，但是如果这些试剂在细胞的过去的研究历史中曾使用过，它们仍然是一个令人担忧的问题，并且必须在测试计划中加以解决。细胞系是否暴露于其他细胞物种或源自其他物种的物质？细胞接触过哪些非动物性添加剂？细胞系易感染哪些病毒？这些都是进行风险评估和制定测试计划时应考虑的重要问题。

病毒制剂的表征测试包括在检测未知病毒的常规广泛筛选分析以及针对特定病毒的测试。进行了广泛的常规筛选测试，以检测未知范围的可能污染物。这些测试包括体外病毒测定，体内病毒检测和电子显微镜检测。还存在许多检测与特定