如果有人问小编，

“你在实验中有没有想抱头痛哭的时刻？”

小编一定会说：“有！宝贝细胞被污染的时候！”

每天起早贪黑地复苏、传代、换液、冻存，

好不容易养到现在。

结果污染了，实验又得重头来过！

当时试剂君心里的OS就是：

生活不只有眼前的苟且，还有远方的苟且啊！

为了不让你们走我的老路，

试剂君含泪为你们整理了：

细胞污染的常见原因及处理办法

以免让大家在细胞污染的道路上越走越远。

细胞污染的常见原因

细菌

细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。

真菌

一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不像细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。

支原体

黑色的，培养液一般会浑浊。国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中最常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。

黑胶虫

细胞培养之猜猜我是谁系列。关于黑胶虫到底是什么，目前还没有定论。黑胶虫可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。常常是细胞生长状态良好，且观测到的运动物无明显增多，且培养液颜色、透明度无明显变化。

原虫

培养液可轻微浑浊，显微镜下那些细小的点状物数量非常多，轻微活动。细胞虽然可以生长但繁殖速度却明显减慢，而且细胞状态不好，边缘不清楚，细胞不透亮。它们与细胞可共生但会与细胞争夺营养。这种共生是非常普遍的，但他们的数量小，细胞站优势所以不会影响到细胞的正常生长，只有当他们到达一定的数量时就会影响到细胞的生长，最终形成恶性循环。

细胞污染案例革兰氏阳性菌革兰氏阴性菌（洋葱佰克霍德尔菌）丝状菌污染图片（真菌污染）白色念珠菌污染支原体污染（电镜观察：煎蛋状）支原体污染（电镜观察：其他形状）黑胶虫污染细胞污染处理办法防患于未然

预防是防止细胞培养过程中发生污染的最好办法。只有预防工作做在前，才能将发生污染的可能性降到最小程度。一般预防可从以下几方面着手

1、在培养液中添加抗生素。

2、从物品、用品消毒灭菌着手：细胞培养所用物品清洗、消毒要彻底，各种溶液灭菌除菌要仔细，并在无菌试验阴性后才能使用。操作室及剩余的无菌器材要定期清洁消毒灭菌。

3、从操作者做起：

(1)进无菌室前要用肥皂洗手，按规定穿隔离衣。工作开始要先用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和烧灼瓶口。

(2)操作者动作要轻，必须在火焰周围无菌区内打开瓶口，并将瓶口转动烧灼。操作时尽量不要谈话，若打喷嚏或咳嗽应转向背面。

(3)操作时要常更换吸管，一旦发现吸管口接触了手和其他污染物品应弃去。实验完毕用消毒水浸泡的纱布擦台面。

4、防止细胞交叉污染：

(1)在进行多种细胞培养操作时，所用器具要严格区分。

(2)在进行换液或传代操作时，注射器和滴管不要触及细胞培养瓶瓶口，以免把细胞带到培养液中污染其他细胞。

(3)细胞一旦购置或从别处引入，均应及早留种冻存，一旦发生污染可重新复苏培养。

5、无菌室的彻底消毒：

(1)0.1%新洁尔灭全面彻底擦洗无菌室;

(2)培养细胞一经污染，多数较难处理。如果污染细胞价值不大，宜弃之;在寻找原因后彻底消毒操作室，复苏或重新购置细胞，再培养。

污染的清除

若污染细胞价值较大，又难于重新得到，可采取以下办法清除。

细菌和真菌的清除：使用抗生素

抗生素对杀灭细菌较有效。联合用药比单独用药效果好。预防用药比污染后再用药效果好。预防用药一般用双抗生素，污染后清除用药需采用大于常用量5～10倍的冲洗法，于加药后作用24～48小时，再换常规培养液。此法在污染早期有效。

支原体的清除

1、用MRA处理：用MRA(MycoplasmaRemovalAgent)处理细胞，每4天换一次液,连续处理15天以确保细胞纯洁健康，效果好。

2、用清洗纯化法清除支原体污染的方法：细胞营养驯化→优质细胞群的筛选→细胞清洗→反复离心洗涤。其原理是利用离心力、细胞、微生物质量和悬液的浮力差达到清除支原体的目的。由于支原体个体小且除发酵支原体外多为细胞外寄生,所以通过反复洗涤细胞和低速离心换液使其中潜在的支原体数量降低至极限。结合敏感抗生素的抑杀作用，可达到更好的效果。

3、药物辅助加温处理：先用药物处理后，再将污染的组织培养物放在41℃培养18小时，可杀死支原体，但对细胞有不良影响。

4、使用支原体特异性血清：用5%的兔支原体免疫血清可去除支原体污染，因特异抗体可抑制支原体生长，故经抗血清处理后11天即转为阴性，并且5个月后仍为阴性。但此法比较麻烦，不如用抗生素方便、经济。

今天的细胞污染专题就到这，祝愿大家养好细胞，顺利毕业！

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本文转载自基因帮科研服务