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支原体冻干过程和注意事项概述
作者:惘闻
编辑:兔兔子
来源:实验助手app
支原体是细胞外生存的最小微生物,是一类缺乏细胞壁的原核细胞型微生物,大小一般在0.3~0.5um之间。支原体污染是细胞培养中一个很常见的问题,可能有高达87%的细胞系发生过支原体污染。支原体在光学显微镜下不可见,一般不会引起培养物混浊,因此难以察觉。支原体污染能消耗营养物,并改变培养细胞的代谢、增殖特征及形态,影响细胞生长。
图1.支原体模型版《中国药典》支原体检查法中规定:主细胞库、工作细胞库、病毒种子批、对照细胞以及临床治疗用细胞进行支原体检查时,应同时进行培养法和指示细胞培养法(DNA染色法)。
指示细胞培养法中,需用已知阳性的供试品标准菌株2ml替代供试品,同法操作,作为阳性对照。支原体标准菌株用于阳性对照试验,可使用口腔支原体(ATCC)或肺炎支原体(ATCC)。
口腔支原体(ATCC)或肺炎支原体(ATCC)主要从ATCC(美国典型培养物保藏中心)中购买,但由于支原体并不好保种,导致许多企业无法得到支原体标准菌株,从而无法开展细胞库的支原体检查。
本人就简要概述下支原体的保种的过程和一些注意事项,主要采用冻干法。培养基主要采用ATCC配套的ATCC培养基和ATCC培养基。具体培养基配方请自行到ATCC白癜风养生白癜风痒是不是快好啦