1、细胞冻存管解冻培养时，是否应马上去除DMSO？

除少数特别注明对DMSO敏感的细胞外，绝大部分细胞株（包括悬浮性细胞），在解冻之后，应直接放入含有10~15ml新鲜培养基的培养瓶中，待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可，如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附的问题。

2、可否使用与原先培养条件不同的培养基？

一般不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，若骤然使用和原先提供的培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。细胞培养过程中，最好不要更换培养基，若必须更换，可尝试半换，让细胞逐渐适应新的培养基。

3、可否使用与原先培养条件不同的血清种类？

不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。

4、何时须更换培养基？

视细胞生长密度而定，或遵照细胞株基本数据上的更换时间，按时更换培养基即可。

5、贴壁细胞消化传代时所使用的trypsin-EDTA浓度？应如何处理？

一般使用的trypsin-EDTA浓度为0.25%trypsin-0.02%EDTA。消化液第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于-20℃，避免反复冻融造成trypsin的活性降低，并可减少污染机会。

6、悬浮细胞应如何传代处理？

一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养瓶中，稀释细胞浓度即可，若培养液太多时，可将培养瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时取出一部分含细胞的培养液至另一新的培养瓶，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复前述步骤即可。

7、欲将一般动物细胞离心下来，其离心速率应为多少转速？

欲回收动物细胞，其离心速率一般为g(约rpm)，离心5~10min，过高的转速，将造成细胞死亡。

8、应如何避免细胞污染？

细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。污染的主要原因是无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染的血清和污染的细胞等。严格无菌操作技术、清洁的环境、与品质良好的细胞来源和培养基配制是减低污染的最好方法。

9、如果细胞发生微生物污染时，应如何处理？

加入相应抗生素，直接灭菌后丢弃。

10、支原体(mycoplasma)污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？

不能。除极有经验的专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株，无法以其外观分辨。

11、支原体污染会对细胞培养有何影响？

支原体污染几乎可影响所有细胞的生长参数，代谢及研究任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果的数据方有意义。

12、侦测出细胞株有支原体污染时，该如何处理？

直接灭菌后丢弃，以避免污染其它细胞株。

13、购买细胞冻存管经解冻后，为何会发生细胞数目太少的情形？

研究人员在冻存细胞的培养时出现细胞数目太少，大都是因为离心过程操作上的失误，造成细胞的物理性损伤以及细胞流失。建议细胞解冻后不要立刻离心，应待细胞生长隔夜后再更换培养基。

14、大部分添加物和试剂最多可以冻融3次，如果次数更多，包含蛋白的溶液可能会引起一定水平的降解和沉淀，影响性能。

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