经验分享丨如何解决细胞培养中的支原体污染

细胞培养过程中,总会因为取材不当、操作不慎或灭菌不彻底等各种各样的原因导致细胞污染。细胞污染有细菌污染、真菌污染、支原体污染、病毒污染等多种类型。

这些污染中,细菌和真菌污染很容易被检测到,然而支原体造成的污染一般很难察觉,且污染率高(可达63%),影响最严重、传播最广泛、最具毁灭性。

支原体污染率为何如此之高?

支原体是广泛存在于自然界中能独立生活的最小微生物,直径~nm,很容易透过0.22~0.45μm滤膜。

支原体没有细胞壁,常用抗生素如青霉素和链霉素对支原体没有效果。

支原体污染后,即使生长密度高达~CFU/mL,也没有明显的污染迹象,如浑浊,pH值变化,细胞病变等。

实验室之间的交叉污染,导致支原体污染扩散。

支原体污染后果很严重

受支原体污染细胞生长会变慢,状态会变差,虽不会马上使细胞致死,但却会影响细胞内的各种参数:如改变细胞膜抗原性,改变DNA转染效率,导致染色体畸变等。这些影响会造成实验结果不准确和珍贵细胞的损失。

因此,定期进行支原体检测,

确保细胞培养体系无支原体,尤为重要

MP支原体检测染色试剂盒

MPBiomedicals支原体检测染色试剂盒MycoplasmaHoechstStainKit用于细胞培养中原位染色检测支原体及其他原核生物。

检测原理

Hoechst染料能够与DNA特异性结合,在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一的荧光小点,即为支原体的DNA,证明细胞被支原体污染。

产品优势

可靠性,使用TCA(美国组织培养学会)引用的Hoechst荧光染色法(TCAprocedureNo.)

完整性,带全套检测试剂和对照组,只需提供细胞培养液

用途广,检测支原体,细菌,酵母和真菌

速度快,检测全程不超过2个小时

污染的判断

利用荧光显微镜的~倍油镜观察细胞培养液(激发光波长:nm,发射光波长:~nm),若观察到细胞核及细胞周围有许多荧光小亮点,即为支原体,它们的直径普遍在0.1-0.3μm之间,形态各异,如球形或细丝。

如何去除支原体污染

事实上,一旦发现支原体污染,细胞大势已去,最佳处理方式是将细胞高温灭菌后丢弃,重新复苏。但很多实验室耗费了辛辛苦苦构建的特殊细胞株,例如抗药性细胞株,基因转染细胞株,再次构建又需要耗费大量的时间和经费,需要采用有效的支原体去除试剂。

MP支原体去除试剂

MPBiomedicals支原体去除试剂MycoplasmaRemovalAgent(MRA)能够有效地解决细胞培养中由支原体造成的污染问题。MRA是抗生素喹啉家族的衍生物,通过抑制支原体DNA解旋酶去除支原体感染。

产品优势

时间短,一周内可消除多种支原体

浓度低,0.5ug/mL即可有效去除支原体

可预防,0.1ug/mL具有预防支原体复发的作用

毒性低,推荐浓度下使用,几乎无毒性

适用广,可用于绝大多数哺乳动物细胞系

引文多,超过篇权威文献引用

产品信息

参考文献:

1.ShubhraSingh,etal.TreatmentandcontrolofmycoplasmacontaminationinPlasmodiumfalciparumculture.ParasitolRes.:-,

2.O’DeaK.P.,etal.OptimaltumornecrosisfactorinductionbyPlasmodiumfalciparumrequiresthehighlylocalizedreleaseofparasiteproducts.Infect.Immum.71:-,

3.RoweJ.A.,etal.ImplicationofmycoplasmacontaminationinPlasmodiumfalciparumcultureandmethodsforitsdetectionanderadication.Mol.Biochem.Parasitol.,92:-,

4.PeppelK.,etal.OverexpressionofGprotein-coupledreceptorkinase-2insmoothmusclecellsatte-nuatesmitogenicsignalingviaGprotein-coupledandplatelet-derivedgrowthfactorreceptors.Circulation,:-,

5.TruccoC.,etal.DNArepairinpoly(ADP-ribose)polymerase-deficientcelllines.NucleicAcidRes.,26:-,

预览时标签不可点收录于话题#个上一篇下一篇



转载请注明地址:http://www.hongxbscs.com/zynx/7184.html
  • 上一篇文章:
  • 下一篇文章:
  • 热点文章

    • 没有热点文章

    推荐文章

    • 没有推荐文章