肺炎支原体Mycoplasmapneumoniae（MP）是儿科常见的致病原，除了可能导致肺炎，还可能导致鼻咽炎、鼻窦炎、中耳炎、咽扁桃体炎、气管支气管炎、细支气管炎和肺炎等。

学龄期儿童的上呼吸道疾病中约5%为MP感染，儿童和青少年扁桃体炎的MP检测阳性率为5%～16%。研究认为MP引起的上呼吸道感染是肺炎支原体肺炎的20倍，MP也是引起中耳炎的重要病因。

由于临床表现和影像学表现不具有特异性，MP的诊断需要实验室检查联合症状体征进行确诊。

我们就MP的实验室检测来进行一下详细了解。

哪些方法可以进行MP检测？

关于MP的检测主要有两大类

一、病原学检测

1、MP培养

2、MP直接检测

3、分子生物学检测：DNA、RNA

二、血清学检测

MP感染机体后,体内可产生特异性的IgM、IgG、IgA抗体，血清学检测就是检测这些抗体，来判断感染的情况。

病原学检测

MP培养用合格的呼吸道标本进行培养，使用专用的液体培养基进行培养，至少10-14天，最佳培养时间需要21天或者更长。呼吸道标本包含咽拭子、痰液、支气管肺泡灌洗液等，均可以进行MP病原体直接检测。直接培养法的敏感度为34.78%，MP培养阳性的诊断特异度接近%。一旦培养阳性能够确诊，是MP感染的金标准。快速培养检测试剂盒，以经典的培养方法为基础，耗时约6-90小时，通过培养过程中产酸使试剂pH值降低，指示剂颜色变化来判断MP的存在，但是结果敏感性、特异性不高。MP直接检测使用免疫双抗夹心法，使用MP黏附相关P1蛋白单克隆抗体直接检测MP抗原，如果标本适宜，提取到适量的感染细胞，敏感性及特异性均可达到接近%。但是MP感染的患者的咽拭子标本病原体含量一般为1×10?～1×10?CFU/L，咽拭子标本有可能达不到达不到该方法的测量阈值1×10?CFU/L，因此标本采样会影响到患者检验的敏感性，可能会出现假阴性。分子生物学检测分子生物学检测主要有DNA和RNA检测两大类，可以进行快速诊断。DNA检测其检测样本为痰、鼻咽拭子、支气管肺泡灌洗液，检测靶标为MP-DNA，根据P1蛋白、16SrRNA设计引物。检测方法包括：荧光定量PCR和环介导等温扩增（loop-mediatedisothermalamplification，LAMP）。定量检测以1×103拷贝数/L或1×103U/L为单位报告，如果检测结果高于检测方法的上限，则报告≥XX×103拷贝数）/L或≥XX×103U/L，低于检测下限则报告XX×103拷贝数/L或XX×103U/L。局限性：MP死亡后其DNA仍可存在于部分患者体内，时间达7周～7个月，且不易降解，导致DNA检验结果不能很好地用于治疗效果的评估，即在患者的恢复期存在假阳性可能。RNA检测检测样本为痰、咽拭子或支气管肺泡灌洗液。检测方法：实时荧光恒温扩增技术，靶标为16SrRNA，它在MP中以多拷贝形式存在（多达10?拷贝量），其灵敏度和准确性与DNA检测方法相比都有很大提高。由于RNA随病原体死亡而降解，可作为评价MP感染转归、药物疗效的指标，其检测结果与MP的感染严重程度相关性较好，因此MP的RNA检测是目前早期快速诊断、判断疗效的最好方法之一。可用于现症感染的诊断及评价MP感染治疗的疗效和预后。局限性：标本采集后应及时进行前处理，以避免假阴性结果。标本的选择按照MP含量高低依次为：支气管肺泡灌洗液、痰液、咽拭子。呼吸道标本室温下30分钟内送检，4℃环境下2～4小时内送检，标本4℃保存不应超过48小时，预计延迟送检的标本应在-70℃条件下保存。

血清学检测

MP感染机体后,体内可产生特异性的IgM、IgG、IgA类抗体。IgM抗体一般在感染后4～5天出现，3～4周后达高峰，持续1～3个月甚至更长，可作为近期感染的诊断指标。IgA抗体在MP感染早期迅速上升，由IgM型转换产生，7～14天至峰值水平，其变化与IgM基本一致。IgG抗体出现较迟，其浓度峰值在感染后的第5周，一般提示有既往感染。颗粒凝集法（particleagglutination，PA）检测的抗体是MP总抗体（IgM、IgG、IgA），是实验室常用的诊断MP感染的血清抗体测定法，无需特殊检测设备，人工操作判读，重复性好，非特异性反应小。抗体滴度可检测范围为1:40～1:，患儿血清抗体滴度≥1:，可以作为MP近期感染或急性感染的参考标准。MP抗体滴度与MP感染患儿严重程度呈正相关，可以为临床治疗及预后判断提供依据。优点：方法重复性好，特异度、敏感度佳。局限性：该方法检测的抗体是MP总抗体，有极少数感染MP的患儿可能出现持续的高滴度，建议再检测MP抗体的亚型，必要时可联合检测MP的核酸分析其原因。免疫胶体金法（immunecolloidalgoldtechnique，GICT）检测标本可以为末梢全血，定性检测MP-IgM抗体，儿童MP-IgM阳性与颗粒凝结法滴度1∶和≥1∶的符合率均为95%；单次测定Mp-IgM阳性对诊断儿童Mp近期感染有价值。优点：检测简便、出具结果迅速，阳性提示MP感染，适合门诊或急诊患儿疑似MP感染快速筛查，适合门诊的快速检测。局限性：MP-IgM快速筛查阴性的结果并不能完全排除MP感染，临床高度疑似时建议进行MP抗体的定量检测或MP核酸检测以进一步明确。间接免疫荧光法（indirectimmunefluorescenceassay，IFA）标本血清中抗体和已知的MP抗原相互作用，发生特异性结合，与标记有荧光素的抗球蛋白抗体结合，在显微镜下观察绿色荧光。主要检测MP-IgM抗体。优点：特异度和敏感度较好，对照明显、结果判读和操作简单。局限性：易受人为判断荧光结果影响，标本抗原含量不足可能会产生假阴性；体内含有类风湿因子、多种自身免疫性抗体等与标本抗原有交叉反应可能出现假阳性。标本保存血清学检测MP抗体为静脉抽取血液标本置于黄色分离胶真空试管内，离心分离血清，如不能及时测定，血清应置于2～8℃保存，保存时间不超过3天。

实验室Mp血清学检测结果的判读

（1）PA抗体滴度≥1∶：提示近期或现症感染。（2）只有IgM抗体（+）：提示近期感染。（3）只有IgM及IgA（+）：提示现症感染。（4）只有IgG抗体（+）：提示既往感染。（5）IgM、IgG及lgA均为（+）/IgM及IgG（+）/lgA及lgG（+）：提示现症感染或近期感染。（6）间隔2～4周双份血清抗体亚型转化/血清抗体水平4倍及以上增加或降低：确诊MP感染。

各种实验室检查的方法选择

能够确诊的检测方法包括：MP病原学采用分子生物学RNA检测；MP血清学检测方法采用PA抗体滴度测定；恢复期和急性期MP-IgG抗体滴度呈4倍及以上增高或减低。MP-IgM抗体检测尤其适用于6月龄以上儿童和免疫功能正常儿童。

参考文献

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